Diagnostika GMO:
Diagnostika geneticky modifikovaných organismů (GMO) je prováděna s využitím metod :
1. PCR (Polymerase Chain Reaction) (kvalitativní) a RT - PCR (kvantitativní) pro diagnostiku specifických sekvencí DNA (např. 35S, NOS)
Princip metody:
PCR je užívána pro amplifikaci částí DNA, která leží mezi dvěma regiony o známé sekvenci. Pro sérii syntetických reakcí, které jsou katalyzovány DNA polymerázou jsou užívány dva oligonukleotidy jako primery. Tyto oligonukleotidy mají odlišné sekvence a jsou komplementární k sekvencím, které leží na protilehlých řetězcích DNA a ohraničují segment DNA, který má být amplifikován.
- Každý cyklus polymerázové řetězové reakce se skládá ze tří kroků: DNA je nejprve denaturována zahřátím v přítomnosti nadměrného množství obou oligonukleotidů a směsi deoxynukleosidtrifosfátů (dNTP)
- Reakční směs je pak ochlazena na teplotu, při které primery mohou hybridizovat s cílovými sekvencemi.
- Poté jsou primery prodlužovány DNA polymerázou.
Cyklus denaturace, hybridizace a syntézy DNA je pak mnohokrát opakován. Protože produkty jednoho cyklu amplifikace slouží jako matrice pro další, každý následující cyklus v podstatě zdvojnásobuje množství žádaného produktu.
2. Imunochemické metody
- Trait Check
- ELISA metody (Enzyme Linked Immuno-Sorbent Assay)
Princip metody:
Je založen na reakci antigenu (transgenního proteinu) s protilátkou, u níž se měří množství navázaných látek pomocí přidání enzymem značeného antigenu či protilátky. Měření se provádí spektrofotometricky (závislost absorbance na koncentraci).
Imunoenzymatické metody mohou být kompetitivní nebo nekompetitivní.
Kompetitivní:
Ag + Ag* + AB = AgAB + Ag*AB + Ag + Ag*
Většinou se měří množství komplexu značeného antigenu s protilátkou Ag*AB, ale je rovněž možné měřit množství nenavázaného značeného antigenu.
Nekompetitivní:
Ag + AB + AB* = ABAgAB* + AB + AB*
Ve většině případů se měří množství navázané značené protilátky (komplex ABAgAB*) za účelem dosažení co nejvyšší citlivosti.
GMO.pdf (89,13 KB)
